病情描述:真菌感染的检验项目
副主任医师 首都医科大学宣武医院
真菌感染检测相关要点包括:标本采集依感染部位选对应标本并严格无菌操作,直接显微镜检查用氢氧化钾涂片法可观察菌丝孢子初步判断真菌种类,真菌培养将标本接种特定培养基观察菌落特征鉴定菌种,血清学检查中G试验检测葡聚糖辅助侵袭性真菌病诊断有干扰因素,GM试验检测半乳甘露聚糖辅助曲霉感染诊断有干扰,分子生物学检测的实时荧光定量PCR技术检测核酸特异性敏感性高适用于早期等,儿童采集标本需充分安抚且血清学要考虑代谢特点,老年人采集标本考虑身体耐受性及免疫影响结果需结合整体健康状况综合判断。
一、标本采集
根据真菌感染部位选择相应标本,如皮肤、指甲感染取皮屑、痂皮或甲屑;浅部黏膜感染取分泌物;深部感染如血流感染取血液,中枢神经系统感染取脑脊液等。采集标本时需严格无菌操作,避免外界杂菌污染,以确保检验结果准确。
二、直接显微镜检查
(一)氢氧化钾涂片法
将标本置于载玻片上,滴加10%~20%氢氧化钾溶液,盖上盖玻片后镜检。可直接观察标本中有无真菌菌丝或孢子,通过菌丝形态初步判断真菌种类,如念珠菌感染可见假菌丝及芽孢,曲霉感染可见分隔菌丝等。该方法简便快速,能为初步诊断提供依据,但阳性率受标本采集及镜检操作影响。
三、真菌培养
将标本接种于沙保弱葡萄糖琼脂培养基等,置于25~28℃培养(深部真菌可37℃培养)。观察菌落形态、颜色、生长速度等特征。不同真菌培养特性有差异,如白色念珠菌菌落呈奶油色、表面光滑;光滑假丝酵母菌菌落更湿润;曲霉菌落呈绒毛状、颜色多样等。真菌培养可进一步鉴定菌种,是确诊真菌感染的重要依据,但培养周期一般需3~7天甚至更长。
四、血清学检查
(一)1,3-β-D-葡聚糖检测(G试验)
可检测侵袭性真菌感染,尤其适用于曲霉菌、念珠菌等感染的辅助诊断。G试验主要检测真菌细胞壁成分1,3-β-D-葡聚糖,阳性提示可能存在真菌感染,但需注意某些干扰因素,如使用多糖类药物、血液透析等可能导致假阳性,标本被污染也可能影响结果。
(二)半乳甘露聚糖检测(GM试验)
主要用于侵袭性曲霉感染的辅助诊断,在曲霉感染早期即可出现阳性。GM试验检测曲霉细胞壁的半乳甘露聚糖抗原,需注意标本采集时间及可能的干扰因素,如使用哌拉西林/他唑巴坦等药物可能产生假阳性。
五、分子生物学检测
(一)实时荧光定量PCR技术
通过检测标本中真菌的核酸,特异性和敏感性较高。可快速准确检测出真菌病原体,尤其适用于早期感染或标本量少的情况,能明确真菌种类及进行定量分析,但技术要求较高,需严格控制实验条件以避免污染导致假阳性。
特殊人群注意事项
儿童:采集标本时需充分安抚,避免因哭闹导致标本采集不顺利或污染,血清学检查需考虑儿童生理代谢特点对检测结果的影响,如G试验在儿童中的正常参考值可能与成人不同,检测时需结合儿童具体情况分析。
老年人:可能合并多种基础疾病,标本采集时需考虑其身体耐受性,如血液标本采集需轻柔操作,真菌培养时需关注老年人免疫功能低下可能影响真菌生长,导致培养阳性率降低等情况,检验结果分析时需结合老年人整体健康状况综合判断。