核酸检测的方法

实时荧光定量PCR法利用荧光标记特异性探针在PCR扩增时探针被降解释放荧光信号监测核酸定量，灵敏度高特异性强，样本采集中常见鼻咽口咽拭子需规范流程且特殊人群有操作注意；等温扩增法中环介导等温扩增在恒定温度下用4种引物扩增，无需昂贵仪器适基层快速检测，样本采集有共通性且特殊人群需考虑温度等相关环节影响。

一、实时荧光定量PCR法

1.原理：利用荧光标记的特异性探针，在聚合酶链式反应（PCR）扩增过程中，探针与模板结合，随着扩增进行，探针被核酸外切酶降解，荧光信号释放，通过检测荧光信号强度实时监测扩增产物，从而实现对核酸的定量检测。该方法灵敏度高，能精准检测样本中极微量的特定核酸序列，特异性强，可准确区分目标核酸与非目标核酸。

2.样本采集与处理：常见样本类型包括鼻咽拭子、口咽拭子等，采集时需遵循规范流程以确保样本质量，采集后迅速将样本置于特定保存液中保存运输，避免样本降解影响检测结果。对于儿童等特殊人群，采集过程需轻柔操作，减少不适；有基础疾病患者应在稳定状态下进行采集，防止因采集过程引发身体应激反应干扰结果。

二、等温扩增法

1.环介导等温扩增（LAMP）：在恒定温度（通常60~65℃）下进行核酸扩增，通过设计4种特异性引物识别靶序列的6个区域，实现核酸的高效扩增。该方法无需昂贵的PCR仪器，操作相对简便，适用于基层医疗机构或现场快速检测场景。但相比实时荧光定量PCR法，其灵敏度和特异性可能存在一定差异，需根据实际检测需求选择。对于样本采集要求与实时荧光定量PCR法有一定共通性，同样需规范采集以保证样本有效性，特殊人群检测时需考虑其耐受程度，如儿童可能因温度感知与成人不同，操作时需注意温度控制相关环节对其的影响。